Jika anda sudah mengetahui ukuran fragmen DNA adalah diantara 0.5 – 25 kb (kilo basa) maka dapat langsung memilih pemurnian DNA dengan teknik Gel Agarosa.
Adapun bahan-bahan yang diperlukan adalah:
- Buffer elektroforesis TAE
- Larutan Ethidium Bromida
- Gel Agarosa
- Loading Buffer
- Tray Gel Agarosa
- Sisir (comb) gel
- DC power supply
Jika semua bahan sudah siap, langkah selanjutnya adalah
ABSTRACT
SRI NURUL ‘AINI. J2B003098. CLONING GENE xyn ENCODING XYLANASE ENZYMES FROM Geobacillus stearothermophillus IN TO Escherichia coli DH5α. GENETIC LABORATORY OF DIPONEGORO UNIVERCITY & CBRG (Carbohydrat Bioengineering Research Group) RESEARCH CENTER FOR BIOTECHNOLOGY - INDONESIAN INSTITUTE OF SCIENCE. TO BE LEADED BY HERMIN PANCASAKTI KUSUMANINGRUM REJEKI SITI FERNIAH AND BUDI SAKSONO.
ABSTRAK
SRI NURUL ‘AINI. J2B003098. ISOLASI cDNA DARI ALGA EUKARIOTIK Dunaliella salina STRAIN HPK. LABORATORIUM MIKROBIOGENETIKA. UNIVERSITAS DIPONEGORO SEMARANG. DIBAWAH BIMBINGAN REJEKI SITI FERNIAH DAN HERMIN PANCASAKTI KUSUMANINGRUM.
ABSTRAK
SRI NURUL ‘AINI. J2B003098. KLONING GEN xyn PENYANDI XILANASE DARI Geobacillus stearothermophillus KE DALAM Escherichia coli DH5α. LABORATORIUM GENETIKA UNIVERSITAS DIPONEGORO SEMARANG & CBRG (Carbohydrat Bioengineering Research Group) PUSLIT BIOTEKNOLOGI LEMBAGA ILMU PENGETAHUAN INDONESIA BOGOR. DIBAWAH BIMBINGAN HERMIN PANCASAKTI KUSUMANINGRUM REJEKI SITI FERNIAH DAN BUDI SAKSONO.
Xilanase (XYN) adalah enzim yang berperan penting dalam hidrolisis xilan menjadi xilosa. Xilanase banyak dimanfaatkan sebagai bahan pemutih dalam industri kertas, campuran pakan ternak, penjernih juice, meningkatkan kwalitas roti dan bermanfaat dalam pembuatan gula xilosa. Kebutuhan akan xilanase diperkirakan akan terus meningkat, sehingga perlu adanya suatu pendekatan untuk meningkatkan produksi xilanase. Pencarian bakteri sumber gen xyn penyandi enzim XYN telah dilakukan dan didapatkan gen xyn dari Geobacillus stearothermophilus. Genom G. stearothermophilus telah diisolasi. Amplifikasi gen xyn dari G. stearothermophilus telah berhasil dilakukan dengan PCR mix RTG (Ready To Go) menggunakan primer xynF dan xynR dan didapatkan fragmen dengan ukuran 1266 pasang basa. Hasil amplifikasi kemudian diinsersikan ke dalam plasmid pGEM-T Easy dan ditransformasi ke dalam Escherichia coli DH5α. Gen xyn berhasil dikloning ke dalam bakteri inang E coli DH5α dalam bentuk plasmid rekombinan pGEMTxyn. Analisis hasil sequencing terhadap plasmid rekombinan pGEMTxyn menunjukkan bahwa gen tersebut adalah xyn dari G.stearothermophilus. Gen xyn selanjutnya dapat diinsersikan ke dalam plasmid pET-21b(+) dan ditransformasi ke dalam bakteri inang E.coli BL21 untuk mendapatkan ekspresi protein.
